在生物医学研究中，蛋白质的提取是一个至关重要的步骤。本篇文章将详细介绍哺乳动物蛋白提取试剂盒的组成、保存条件及提取步骤，帮助研究人员更高效地获取高质量的蛋白质样品。

试剂盒成分

哺乳动物蛋白提取试剂盒包含以下成分：

• 5X Buffer：10 ml
• 5X NaCl：10 ml
• 5X SDS：10 ml
• 5X DOC：10 ml
• 5X NP-40：10 ml
• 20X PBS：10 ml
• Protease inhibitor cocktail：0.5 ml

保存条件

此试剂盒在常温下可保存，但请注意，Protease inhibitor cocktail 需在-20°C条件下保存，有效期为24个月。适当的保存条件可以确保试剂的活性与稳定性，从而为您的研究提供支持，尤其是与尊龙凯时人生就博相关的生物医学领域。

提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40的比例为1:1:1:1:1（v/v）来配制细胞裂解缓冲液。每1 ml的细胞裂解缓冲液可用于提取106~107个细胞或5~20 mg组织的蛋白质。在使用前，请加入10 μl的Protease inhibitor cocktail。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：首先去除细胞生长培养基，用PBS缓冲液冲洗两次，然后加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml）。将细胞置于冰袋中，在摇床上孵育30分钟，并阶段性重悬细胞。最后，将细胞刮除并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：在700xg下离心5分钟后，弃去上清液。使用PBS重悬并洗涤两次，随后在4°C下离心去掉上清液。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），在冰袋中孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切成小块，并用PBS冲洗两次。添加细胞裂解缓冲液（5~20 mg组织/ml），将样品转移至预冷的微量匀浆器中，冰上均匀化组织30~50次，需要注意均质过程对靶蛋白功能完整性的重要性。

3. 离心与收集蛋白质

在4°C下以12,000xg离心10分钟，以沉淀细胞碎片，或以100,000xg的高速离心45分钟制备蛋白质溶液。最后，将含有蛋白质的上清液转移到冷冻管中。在冰上存放可立即使用，或将蛋白质溶液保存至-70°C以备后续实验。

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